Kỹ thuật nhuộm Gram – Viện nghiên cứu và đào tạo khoa học sức khỏe TPHCM

Mục tiêu

1. Chuẩn bị được thuốc nhuộm và bộ dụng cụ để tiến hành nhuộm
2. Thực hiện được các bước nhuộm Gram từ bệnh phẩm.
3. Phân biệt được đúng vi khuẩn bắt màu Gram dương và Gram âm.

Nội dung bài viết

1. Giới thiệu

Nhuộm Gram là một phương pháp nhuộm do Gram sáng chế năm 1884. Phương pháp này giúp phân biệt vi khuẩn bắt màu Gram (Gram dương) và vi khuẩn không bắt màu Gram (Gram âm), từ đó giúp cho việc chẩn đoán xác định loại vi khuẩn.

Bạn đang đọc: Kỹ thuật nhuộm Gram – Viện nghiên cứu và đào tạo khoa học sức khỏe TPHCM

2. Chuẩn bi thuốc thử

• Dung dịch tím gentian.
• Dung dịch lugol.
• Cồn tẩy 95°.
• Dung dịch đỏ fucshin pha loãng 1/10.

3. Kỹ thuật nhuộm

( 1 ) Dàn bệnh phẩm hoặc vi trùng lên trên lam kính sạch
( 2 ) Cố định bằng cách hơ qua trên ngọn lửa đèn cồn. Để nguội
( 3 ) Nhuộm :

• Phủ dung dịch tím gentian, để khoảng 30 giây. Rửa dưới vòi nước chảy nhẹ.
• Phủ dung dịch lugol để cố định màu, để khoảng 30 giây. Rửa dưới vòi nước.
• Tẩy màu bằng cồn 95°, để khoảng 30 giây. Rửa nước.
• Phủ dung dịch đỏ fucshin 1/10 của Gram, để khoảng 30 giây. Rửa dưới vòi nước.

( 4 ) Để khô tự nhiên .
( 5 ) Soi dưới vật kính cầu .

4. Nguyên tắc nhuộm

Xem thêm: Taxi 2 Công Nghệ Số Toàn Cầu, Công Ty Cổ Phần Đầu Tư Công Nghệ Số Toàn Cầu

• Nhuộm tím gentian: Nhuộm tất cả vi khuẩn thành màu tím đen.
• Nhỏ lugol: Gắn màu tím vào vi khuẩn đậm hay nhạt tuỳ loại.
• Tẩy cồn 95°: Tẩy màu một số vi khuẩn mà dung dịch lugol không gắn chắc màu tím vào được. Không tẩy màu một số vi khuẩn mà màu tím đã được dung dịch lugol gắn chắc vào. Bước tẩy cồn rất quan trọng nên phải thật chú ý trong quá trinh nhuộm.
• Nhuộm đỏ fucshin: Nhuộm đỏ trở lại những vi khuẩn đã bị cồn tẩy màu. Không có tác dụng trên vi khuẩn đã bị nhuộm tím đen.

Gram (+)	Gram (-)

Nguyên lý nhuộm Gram

5. Cơ chế bắt màu Gram

Có sự độc lạ giữa vi trùng Gram ( + ) và vi trùng Gram ( – ) về cấu trúc của lớp peptidoglycan ( murein ) ở thành tế bào vi trùng .

• Các vi khuẩn Gram (+) có lớp peptidoglycan dày hơn làm cho vi khuẩn giữ chắc màu tím gentian và không bị tẩy màu bởi cồn. Sau khi nhuộm fucshin, vi khuẩn không bắt màu đỏ mà vẫn giữ nguyên màu tím, đó là vi khuẩn Gram (+).
• Các vi khuẩn Gram (-) có lớp peptidoglycan mỏng hơn làm cho vi khuẩn không giữ được màu tím gentian và bị tẩy màu bởi cồn trở thành không màu. Khi nhuộm fucshin vi khuẩn bắt màu đỏ, đó là vi khuẩn Gram (-).

6. Đọc kết quả

• Vi khuẩn Gram (+) bắt màu tím sẫm gentian: Tụ cầu, liên cầu, phế cầu, trực khuẩn bạch hầu, trực khuẩn than.
• Vi khuẩn Gram (-) không bắt màu tím gentian nên có màu đỏ fucshin: Lậu cầu, não mô cầu, E. Coli, Shigella, Salmonella, tả.

7. Lưu ý về nguyên nhân nhuộm sai

Gram dương giả

• Do tiêu bản được cố định khi chưa khô, tiêu bản quá dày.
• Cặn thuốc nhuộm (phải lọc trước khi dùng).
• Đổ chưa hết lugol.
• Tẩy cồn chưa đủ thời gian.
• Dung dịch fucshin quá đậm hay nhuộm quá lâu.

Gram âm giả

Xem thêm: Trường Đại học Bách Khoa ĐHQG-HCM | Ngành Kỹ thuật Môi trường

• Do không thay lugol
• Tẩy cồn quá lâu và tráng không kỹ.

Bảng kiểm cho kỹ thuật nhuộm gram

TT	Các bước tiến hành kỹ thuật	Y	N
1.	Chuẩn bị thuốc nhuộm: tím gentian, lugol, cồn 95°, đỏ fucshin pha loãng 1/10. Dụng cụ : làm kính, đèn cồn, diêm, bút viết lam, tăm bông, nước muối sinh lý, vòi nước chảy nhẹ, bình đựng chất thải bỏ, đồng hồ đeo tay bấm giây .
2.	Đánh dấm lam kính: đánh số bệnh phấm hoặc ký hiệu bệnh phẩm vào bên góc, mặt trái lam nhuộm.
3	Dàn bệnh phẩm hoặc khuẩn lạc vi khuẩn lên trên lam kính sạch.
4.	Cố định bệnh phẩm: bằng cách hơ trên ngọn lửa đèn cồn, để nguội.
5.	Phủ dung dịch tím gentian, đế 30 giây. Rửa dưới vòi nước chảy nhẹ.
6.	Phủ dung dịch lugol để cố định màu, để 30 giây. Rửa dưới vòi nước.
7.	Tấy màu bằng cồn 95°, đế 30 giây. Rửa nước.
8.	Phủ dung dịch Fucshin 1/10, để 30 giây. Rửa dưới vòi nước.
9.	Để khô tự nhiên.
10.	Soi dưới vật kính dầu( 100X).

Source: https://vh2.com.vn
Category : Công Nghệ